Diagnóstico X Frágil

El sistema Amplidex™ FMR1 PCR de Asuragen permite la detección y cuantificación del número de repeticiones CGG en el gen FMR1.
El ensayo consiste en una reacción de PCR de DNA genómico purificado de sangre total seguido de un análisis de fragmentos en un analizador genético Applied Biosystems y la conversión del tamaño del producto en el número de repeticiones CGG.
Las principales innovaciones del producto se basan en la combinación óptima de primers específicos del gen, un buffer de amplificación para secuencias ricas en GC y condiciones optimizadas para la reacción de PCR.
Constituye una alternativa eficaz a las limitaciones de los métodos actuales de diagnóstico, Southern blotting y PCR.

 

PRINCIPALES CARACTERISTICAS

  • Detecta y cuantifica, con una sola PCR que incluye  3 primers el número de repeticiones CGG en el gen FMR1, incluyendo mosaicos de baja abundancia hasta repeticiones de 1300 CGG.
  • Incluye un tercer primer (específico de regiones CGG) que permite analizar el número de  interrupciones AGG.
  • Cuantifica el porcentaje  de metilación en el gen FMR1, mejorando el tiempo de resultado en un  90% y utilizando  menos del 50% de DNA comparado con el análisis por Southern Blot.
  • Dispone de controles, mezclas de DNA genómico que contienen alelos de múltiples tamaños de repeticiones CGG. Estos controles están bien caracterizados y se pueden utilizar como controles de proceso o lote que cubren varios rangos de tamaño y porcentajes  de metilación diferentes en el gen FMR1.
  • El software de análisis de resultados, Reporter, proporciona el análisis del número de repeticiones CGG de forma  instantánea. Diseñado para ganar velocidad y precisión, utiliza algoritmos validados con miles de perfiles CGG.

BENEFICIOS

  • La combinación de los tres primers en un solo kit  ofrece  un diagnóstico más completo: ayuda a determinar el riesgo de expansión de tripletes y a relacionar el genotipo con fenotipos emergentes relacionados con el gen FMR1 (FXS, FXTAS y FXPOI).
  • Resuelve  definitivamente el diagnóstico de las mujeres homocigotas y heterocigotas al usar el tercer primer específico de regiones CGG.
  • Elimina por completo el uso del Southern Blot, al ser una técnica mucho más sensible.

 

ENLACES

Publicaciones

Visita la web "No más Southern Blots"

 

Gamas

Es un kit de diagnóstico in vitro (CE-IVD) para uso en laboratorios clínicos para la detección de las repeticiones CGG en el gen FMR1.

El dispositivo está diseñado para ayudar en el diagnóstico del síndrome X frágil y de los trastornos asociados, por ejemplo, síndrome de temblor y ataxia  (FX-TAS) y la insuficiencia ovárica primaria (FXPOI), a través de la determinación de repeticiones hasta 200 CGG y detección de los alelos de más de 200 CGG.

El kit proporciona un enfoque sólo de PCR basado en un diseño de tres primers PCR (TP-PCR) para amplificar y detectar alelos incluyendo mutaciones completas.

 

Diferencia clara en los patrones de mujer homocigota y heterocigota

Figura 1. - La diferencia clara en los patrones de mujer homocigota y heterocigota

 

Figura 2.- Mujer con mutación completa con interrupciones AGG como se indica por una disminución repentina en las alturas de los picos del perfil.

 

 

Figura 3.- Mujer que muestra un alelo con el tamaño normal (30 CGG) y un segundo alelo con una premutación (56 CGG).

 

REFERENCIA

Referencia Descripción Formato
76008 AmplideX PCR/CE FMR1 Kit 100 tests

 

  • Detección de todas las expansiones de alelo, incluyendo mosaicos de baja abundancia  hasta repeticiones de por lo menos 1300 CGG.
  • Hasta 875 veces más sensible que el Southern blot.
  • Resolución de mujeres  homocigotas y heterocigotas e indicación del número de interrupciones AGG en la misma reacción.
  • Resultados avalados  por más de 30 publicaciones internacionales.
  • Inyección directa de productos PCR (PCR sin purificar) en plataformas de electroforesis capilar.
  • Solución completa para el análisis de FMR1 incluyendo todos los reactivos necesarios y software de análisis.
  • Resultados con mayor sensibilidad y alta precisión (+/- 1 CGG).
  • El tiempo de manipulación del técnico  se ha reducido significativamente.
  • Facilidad de análisis del gen FMR1 simplificado a través del uso del software Reporter.

El kit AmplideX mPCR FMR1 utiliza un enfoque innovador con una sóla PCR para la detección del estado de metilación del gen FMR1. Estos reactivos determinan el grado de metilación de cada alelo individual en muestras de hombres y mujeres y así eliminan la necesidad de usar técnicas manuales y costosas como el Southern Blot.

Figura 1.- Esquema de trabajo del ensayo mPCR.

 

Figura 2.- Resultados obtenidos

 

Figura 3.- Comparación.

 

REFERENCIA

Referencia Descripción Formato
49442 AmplideX mPCR FMR1 Kit 24 tests

 

  • Amplifica y detecta los alelos normales, intermedios, premutaciones y mutaciones completas.
  • Mide con precisión el porcentaje de metilación para cada alelo FMR1 con  mayor resolución que el análisis de Southern blot.
  • Proporciona mayor sensibilidad para la detección de alelos en mosaico de  baja abundancia.
  • Incluye controles de digestion y amplificación para asegurar el máximo rendimiento en cada muestra.
  • Diseñado para complementar con los reactivos del kit AmplideX® FMR1 PCR.
  • Permite cuantificar el estado de metilación del gen FMR1 con una gran precisión, mejorando el tiempo de análisis en un 90% y usando una mínima cantidad de DNA comparada con el Southern blot.

Son mezclas de DNA genómico que contienen alelos múltiples.

Estos controles están bien caracterizados y se pueden utilizar como controles de proceso o lote que cubren varios rangos de tamaño y estados de metilación diferentes en el gen FMR1.

 

Figura 1.- Resultados del Control AmplideX FMR1 PCR/CE realizados con el kit FMR1 PCR/CE AmplideX.

Figura2 .- Resultados del Control AmplideX mPCR FMR1 realizados con el kit FMR1 AmplideX mPCR.

 

REFERENCIAS

Referencia Descripción Formato
49514 AmplideX mPCR FMR1 Control 24 µl
49513 AmplideX PCR/CE FMR1 Control 24 µl

 

  • Listos para usar, número exacto de repeticiones CGG o % de metilación.
  • Cubre múltiples gamas de tamaño en el gen FMR1, normal (NOR), premutación (PM)  y mutación completa (FM) con resolución de alelos separados 2 CGG.
  • Amplificación de alelos mutados (FM) de bajo nivel (5%) en presencia de alelos normales y premutados (95%).

Proporciona un análisis rápido y automatizado del genotipo X frágil y  detección de alelos de menor intensidad.

 

 

Figura 1.- Proceso Report

 

Figura 2.- Visualización de resultados.

 

Figura 3.- Detección de mosaicos con una mayor sensibilidad.

 

Figura 4.- Ejemplo de la alta sensibilidad para la detección precisa de alelos con mutación completa poco abundantes (5%).

 

REFERENCIAS

Referencia Descripción Formato
49576 AmplideX PCR/CE FMR1 Reporter  1 Programa

 

  • Instalación sencilla.
  • Rápido, automático, análisis con un solo botón (100 veces más rápido que el análisis manual).
  • Herramienta de análisis automatizado altamente preciso y sensible.
  • Flexible, con sensibilidad para detectar alelos residuales de baja abundancia.
  • Aumenta la calidad de los datos, mayor confianza en la interpretación y reducción del cuello de botella del análisis.
  • Permite incorporar datos de pacientes y análisis de correcciones.
  • Reduce significativamente el tiempo de análisis comparado con el análisis manual.
  • Permite eliminar artefactos.
  • Capacidad para resolver picos saturados de tamaño similar.
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