TÉCNICA DE CITOMETRÍA DE FLUJO. FlowPRA™

En este importante ámbito dentro de la Histocompatibilidad, One Lambda ha sacado al mercado dos nuevas técnicas junto a la tradicional de citotoxicidad: ELISA y Citometría de flujo. Estas representan un paso adelante en la detección de anticuerpos HLA.
Sus principales ámbitos de aplicación se encuentran en la monitorización de los pacientes pretransplantados y posttransplantados de órganos sólidos.

Se pueden mencionar como principales beneficios de estas nuevas técnicas los siguientes:
• Mayor sensibilidad
• Mayor especificidad
• Detección de anticuerpos HLA no fijadores de complemento
• Sin interferencias por autoanticuerpos
• Detección de anticuerpos Clase I y II por separado
• Diferencia las reacciones debidas a anticuerpos IgG de las debidas a IgM
• Antígenos HLA purificados
• Ahorro de tiempo del personal
• Homogeneidad del panel antigénico a lo largo del tiempo

Esta línea de productos para la detección de anticuerpos HLA se basa en la tecnología de citometría de flujo. One Lambda ha desarrollado la capacidad de fijar los antígenos en la superficie de beads que son llevados a un citómetro para su análisis.


Esta técnica es la más sensible de las existentes y, al igual que en el caso del ELISA, al trabajar con antígenos purificados se eliminan reacciones extrañas como puede ser en el caso de autoanticuerpos. Del mismo modo, se detectan los anticuerpos HLA no fijadores de complemento.
Se eliminan, al mismo tiempo, los problemas de viabilidad que es un inconveniente cuando se trabaja con paneles celulares.

Los kits detectan los anticuerpos IgG. Opcionalmente se puede hacer uso de un conjugado IgM.

Si se busca determinar la positividad o negatividad y/o %PRA existen dos productos:

FL1-30 y FL2-30


Consisten en un "pool" de 30 distintas preparaciones de beads con antígenos HLA purificados Clase I y Clase II, respectivamente. Se encuentran presentes todas las especificidades comunes así como muchos otros antígenos raros de acuerdo a la frecuencia presente en la población.

Se puede realizar el análisis simultáneo de la Clase I y II.

REFERENCIA
DESCRIPCIÓN
FLI-30 Clase I. %PRA
FL2-30 Clase II. %PRA
   
Cuando lo que se va buscando es identificar las especificidades de los anticuerpos, además del % PRA, se debe utilizar FlowPRA™ específico.

FlowPRA™ específico

Dependiendo de las necesidades del laboratorio se puede optar por alguno de los siguientes productos:

• FL1SP: Panel de 32 preparaciones de beads diferentes. Estas se reparten en 4 grupos de 8.
• FL1SP44: Panel de 44 preparaciones de beads, agrupadas en 4 grupos de 11. 42 llevan antígenos HLA purificados en su superficie y las otras dos son beads de control, situadas en los grupos 1 y 4. Detecta anticuerpos de Clase I.


• FL2SP: Es un panel de 32 preparaciones de beads, agrupadas en 4 grupos de 8, que en su superficie se han fijado antígenos HLA purificados de Clase II.

Cada grupo se incuba con la muestra y el anticuerpo IgG de manera separada del resto de grupos y se pasa por el citómetro para el análisis.

Los beads de control tienen por finalidad determinar el "background" de la muestra cuando se trabaja con el FlowPRA™ específico o FlowPRA™ screening. Su proceso de fabricación es idéntico a los anteriores, con la salvedad de que no se fijan antígenos en su superficie. Emiten en un único espectro lo que permite que puedan distinguirse del resto de beads y por tanto ser mezclados.

Para realizar la calibración del citómetro donde se van a analizar las muestras es absolutamente recomendable pasar un suero positivo (FL1-PC, FL2-PC) y un suero negativo (FL-NC). En el caso de trabajar con el FlowPRA específico deben pasarse por cada uno de los grupos de que se compone el kit.
   
FlowPRA™ Single Antigen
Cada antígeno HLA se fija individualmente en un grupo de beads, sin compartir los beads con otros. Esto es muy interesante en pacientes hiperinmunizados donde, con los métodos tradicionales, es difícil localizar antígenos frente a los cuales no se tengan anticuerpos y, por tanto, reduciendo la posibilidad de un trasplante.

REFERENCIA
DESCRIPCIÓN
FL1HD Locus A/B
FL1HD01 Locus A/B
FL1HD02 Locus A
FL1HD03 Locus B
FL1HD04 Locus B
FL1HD05 Locus B
FL1HD06 Locus B
FL1HD07 Locus B
FL1HD08 Locus AB
FL1HD09 Locus C
FL1HD10 Locus C
FL2HD Locus DRB1/DRB3,4,5/DQB1
FL2HD01 Locus DRB1
FL2HD02 Locus DRB1
FL2HD03 Locus DRB1/DRB3,4,5
FL2HD04 Locus DQB1
FL2HD05 Locus DPB1

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ADSORB OUT TM

El propósito de este reactivo de One Lambda es reducir el alto "background" que en determinadas muestras se produce por uniones inespecíficas de componentes presentes en el suero humano a los beads que se utilizan en el análisis de anicuerpos HLA por citometría de flujo.

Puede utilizarse cuando a la muestra se le va estudiar los anticuerpos mediante cualquiera de los productos FlowPRA® o LABScreen® de One Lambda. El Adsorb OutTM no está pensado para su utilización con LATTM.

En algunos casos, dependiendo del material causante del alto "background", puede no ser totalmente eficaz.

Ref.: ADSORB
Formato: 50 µl (25 tests)