Virus Epstein-Barr (EBV)
EBV es un factor fundamental en la predisposición al desarrollo de los denominados desórdenes linfo-proliferativos (LPD). Diversos estudios han demostrado niveles elevados de DNA vírico en la sangre de pacientes con LPD frente a portadores sanos o pacientes sin LPD. Por tanto, la monitorización de la carga viral posee una gran relevancia para este tipo de pacientes. Además, el desarrollo de nuevos tratamientos ha incrementado la necesidad de pruebas rápidas para la monitorización de las terapias.

Los ensayos para la monitorización de CMV y EBV requieren una serie de características fundamentales:
• Una gran sensibilidad y especificidad para la detección temprana en individuos de alto riesgo.
• La posibilidad de obtener resultados cuantitativos para medir carga viral.
• Rapidez.
• Alto grado de reproducibilidad.

El kit CMV Brite Turbo utiliza una mezcla de anticuerpos para detectar la proteína pp65, un antígeno temprano en la replicación viral, el cual se presenta de forma muy abundante en las células polimorfo-nucleares positivas.
El CMV Brite Turbo utiliza la combinación de anticuerpos C10/C11 para realizar una tinción fluorescente de cito-preparaciones de leucocitos de sangre periférica.
El hecho de poder completar el ensayo en 2 horas, acorta tiempos y permie dar una respuesta rápida al clínico.
La notable reducción del tiempo de preparación y el pequeño volumen de muestra (menos de 2 ml.) incrementa el interés práctico de la antigenemia en la monitorización de la infección por CMV.

Ventajas del kit
• Resultados en 2 horas.
• Se requieren 2 ml. (o menos) de muestra.
• Lisis directa de los hematíes.
• Kit completo. Los reactivos cubren todas las etapas de la técnica, desde el aislamiento celular hasta la tinción.
• Procedimiento sencillo, lectura fácil de los resultados.
• Recomendado especialmente para el diagnóstico y monitorización de la infección por CMV.
• La terapia anti-viral no falsea los resultados.
• Reactivo registrado para diagnóstico in vitro por la FDA (USA) y por AFSSAPS (Francia).

Características del kit
• Reactivos suficientes para 110 pruebas.
• Solución para la lisis de los hematíes.
• Solución de fijación.
• Solución de permeabilización.
• Mezcla de anticuerpos C10/C11.
• Conjugado FITC.
• 5 portas de control, con preparaciones positivas y negativas.

El CMV Brite Turbo kit ha sido registrado por la FDA en Estados Unidos (número de registro K991650) y por la AFSSAPS en Francia (número de registro T 8087 2). Por tanto ha sido registrado oficialmente para diagnóstico in vitro (IVD).

Los dos principales objetivos del ensayo de la antigenemia CMV son:
• Detectar lo antes posible la infección activa por CMV.
• Monitorizar la infección CMV durante el tratamiento.

Los pacientes a los que se aplica esta prueba se agrupan en tres grandes grupos:

• Receptores de transplante de médula ósea.
Estos pacientes son monitorizados de forma rutinaria para la infección por CMV. La antigenemia resulta particularmente adecuada ya que la inmunoterapia reduce notablemente la respuesta humoral, imposibilitando la realización de pruebas serológicas. Además la terapia puede interferir también el ensayo "shell vial".
Para este grupo de pacientes, el CMV Brite Turbo presenta la ventaja de utilizar un menor volumen de muestra que otros kits para antigenemia.

• Receptores de transplantes de órganos.
La terapia inmunosupresora puede provocar la reactivación de una infección previa o la primoinfección a partir del órgano transplantado. Cuando se presentan síntomas adversos es fundamental discriminar entre un rechazo y la infección por CMV. La monitorización con CMV Brite Turbo proporciona información esencial para un correcto tratamiento del paciente.

• Pacientes HIV
Estos pacientes se encuentran severamente inmunodeprimidos y son susceptibles a numerosas infecciones como la provocada por el CMV. La antigenemia ha demostrado su eficacia en la detección de CMV en pacientes HIV.

La sensibilidad global del kit CMV Brite Turbo se ha establecido en un 91%, combinada con una especificidad del 99%.

Los kits Eclipse poseen dos características únicas:
• Amplificación PCR (1) competitiva.
• Hibridación competitiva entre el DNA diana (CMV y EBV) y el DNA estandar competitivo interno (ICN).

El sistema asegura que el ICS DNA compite con el DNA diana durante todos los pasos de la técnica (amplificación e hibridación); de esta forma, las variaciones introducidas en cualquiera de los pasos tendrán el mismo efecto sobre ambos tipos de DNA.
El número de copias de DNA CMV o EBV se calcula a partir de una línea de referencia integrada por 4 puntos de ICS.

Ventajas del kit
• Rápido, preciso y cuantitativo.
• Ensayo estandarizado con gran reproducibilidad.
• Línea interna de referencia para la cuantificación.
• Estandar DNA interno, para una amplificación e hibridación competitivas.
• Sistema de detección no radioactivo sensible y específico.
• Formato habitual en microplaca.
Programa para el procesamiento de los datos (incluido en el kit).

Características del kit
• Reactivos suficientes para realizar cuantificaciones en 24 muestras.
• Placas con 2 x 96 pocillos recubiertos con los "primers" de captura específicos.
• Estandar interno competitivo (ICS).
• Conjunto de "primers" de amplificación para CMV y EBV.
• Sondas de detección para CMV o EBV e ICS.
• Control negativo de hibridación para CMV o EBV.
• Controles negativos y positivos.
• Todos los reactivos y tampones para la hibridación y detección.
• Disquete 3.5" (formato PC) para el procesamiento y análisis de resultados.

Resumen de la técnica